梯度洗脫又稱為梯度淋洗或程序洗脫。在同一個分析周期中，按一定程度不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。
梯度洗脫要求：
梯度洗脫可分為低壓梯度(又稱為外梯度)和高壓梯度(又稱為內梯度)。
(1)低壓梯度裝置。低壓梯度是采用比例調節閥，在常壓下預先按一定的程序將溶劑混合后，再用泵輸入色譜柱系統，也稱為泵前混合。
(2)高壓梯度裝置。由兩臺(或多臺)高壓輸液泵、梯度程序控制器(或計算機及接口板控制)、混合器等部件所組成。兩臺(或多臺)泵分別將兩種(或多種)極性不同的溶劑輸入混合器，經充分混合后進入色譜柱系統。
分級梯度洗脫：
分級梯度洗脫是依據各種離子或離子化合物與離子交換劑的結合力不同而進行分離純化的。離子交換層析的固定相是離子交換劑，它是由一類不溶于水的惰性高分子聚合物基質通過一定的化學反應共價結合上某種電荷基團形成的。離子交換劑可以分為三部分：高分子聚合物基質、電荷基團和平衡離子。電荷基團與高分子聚合物共價結合，形成一個帶電的可進行離子交換的基團。平衡離子是結合于電荷基團上的相反離子，它能與溶液中其它的離子基團發生可逆的交換反應。平衡離子帶正電的離子交換劑能與帶正電的離子基團發生交換作用，稱為陽離子交換劑；平衡離子帶負電的離子交換劑與帶負電的離子基團發生交換作用，稱為陰離子交換劑。
